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技術(shù)文章ARTICLE
小鼠ELISA試劑盒以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,
下面分析小鼠ELISA試劑盒試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法
一、選擇試劑
選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1,標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2,加樣后及時(shí)放入孵箱。
3,加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4,如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5,ELISA試劑盒標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
三、 孵育
可能原因:
1,孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗che底;
2,孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗che底。
解決辦法:
1,貼封片或加蓋;
2,按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
四、洗板
可能原因:
1,采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2,采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不che底;洗板針堵塞,抽吸不wan全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3,反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
解決辦法:
1,ELISA試劑盒保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后zui hao在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2,合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
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